费氏中华根瘤菌HNO1 LRP基因的研究
本工作运用分子生物学方法，通过原位杂交，从费氏中华根瘤菌HN01基因组文库中钓出含有trp基因的阳性克隆，亚克隆并测定了trp基因序列。生物信息学分析，：HN01的trp基因与已报道的苜蓿快生根瘤菌1021相比，在核苷酸水平上同源性有89％，在氨基酸水平上同源性有99％。 通过自杀质粒pK18mob同源单交换的方法构建了lrp基因的非极性突变体GXHNLTA和极性突变体GXHNLllB。通过PCR扩增，得到含有完整trp基因ORF。的片段lrpW，连结到pLAFR3上，获得互补质粒pGXHNL100。互补质粒为供体，通过三亲本接合导入突变株，获得互补株GXHNWA、GXHNWB。 在以脯氨酸、亮氨酸、丝氨酸等氨基酸为唯一碳、氮源的MM培养基中，突变体GXHNLTA、GXHNLTB的生长均滞后于出发菌株HN01。植株试验表明，突变体GXHNLTA、GXHNLB比出发菌株HN01开始结瘤时间提前1天，在结瘤效率、单株瘤数、瘤重、固氮酶活性方面均无显著差别。
- 作者：
- 陈钢
- 学位授予单位：
- 广西大学
- 专业名称：
- 微生物学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2007年
- 导师姓名：
- 武波
- 中图分类号：
- Q93；Q78
- 关键词：
- 费氏中华根瘤菌；LRP基因；三亲本接合；同源单交换；功能互补
- Sinorhizobium fredii；lrp gene；triparental mating；pK18mob homologous single；functional complementation；plant test
- 基金项目：
- 国家重点基础研究发展计划(973计划)